一、摘要

由于成本或溶劑的可獲取性，有時有必要在反相MPLC中采用與原方法不同的溶劑。許多方法使用乙腈，但在純化規(guī)模放大時，可能更傾向于使用其他溶劑。為了提高純化效果，可能需要進行溶劑替換。

本應用說明描述了一種方法，可以簡便地估算替代溶劑的濃度，以獲得與原方法所用溶劑相似的結(jié)果。

二、討論

在反相色譜法中能夠更換溶劑，這使得從分析規(guī)模轉(zhuǎn)換到制備規(guī)模成為可能，或者通過替換溶劑來節(jié)省成本。當所需溶劑不可獲得時，溶劑替換也是有用的。

圖1中的列線圖列出了反相中常用的各種有機溶劑的等效濃度。通過使用垂直線連接當前溶劑濃度與新溶劑的濃度來讀取新溶劑的濃度。40%乙腈（MeCN）的溶劑可以替換為50%甲醇（MeOH）或30%四氫呋喃（THF），以獲得相同的純化效果。實際上，根據(jù)化合物的不同，這可能會有所±5%的變化，但使用列線圖將提供一個接近的起點。

圖1：溶劑間轉(zhuǎn)換時，確定有機溶劑組成的列線圖

等度洗脫

所有實驗都是使用吸附在硅藻土上的尼泊金甲酯和尼泊金丙酯，并通過固體負載柱進行的。這些實驗與采用40%乙腈的分離效果進行了比較。等度洗脫對溶劑濃度非常敏感。圖2顯示40%乙腈的純化結(jié)果與根據(jù)圖一找到的對應溶劑濃度純化的解果。將甲醇和四氫呋喃的濃度調(diào)整5%（圖3）可使純化效果更接近原始的乙腈運行結(jié)果。

圖2：使用基于列線圖的等度洗脫方法純化尼泊金甲酯和尼泊金丙酯的結(jié)果

圖3：使用調(diào)整后的等度洗脫方法純化尼泊金甲酯和尼泊金丙酯的結(jié)果

由于溶劑與不同化合物類別之間的選擇性差異，很難使在不同溶劑中運行的色譜圖完荃匹配。改變沖提溶劑可以利用來調(diào)整洗脫化合物之間的間距。在這范例中，四氫呋喃（THF）與甲醇和乙腈相比顯示出顯著差異。

梯度洗脫

大多數(shù)MPLC純化都是使用梯度洗脫進行的。為了推定不同溶劑所適用的梯度，只需依上述方式于列線圖找出對應沖提濃度后，以等梯度方法運行即可。對于圖4中的例子，梯度從5%乙腈跑到95%乙腈。使用列線圖得到了5%至95%甲醇和5%至69%四氫呋喃的梯度。

三種溶劑都表現(xiàn)出了純化效果，但選擇性略有不同。選擇性差異是因為溶劑之間的轉(zhuǎn)換是非線性的。依照本文闡述方法來調(diào)整反向沖提的有機溶劑便可快速找到更好的通提條件。

圖4：使用乙腈、甲醇和四氫呋喃對尼泊金甲酯和尼泊金丙酯進行梯度純化的色譜圖

三、結(jié)論

C18方法可根據(jù)溶劑的可獲取性或成本輕松轉(zhuǎn)換為替代溶劑。此外，溶劑替換列線圖提供了一種選擇方法，協(xié)助挑選不同的溶劑選擇性。